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| 24.02.2010 | ||||
| 21:30 | Cup Group E | América de Cali | 1-1 | Depor FC |
| 21:30 | Cup Group A | Barranquilla FC | 3-2 | Unión Magdalena |
| 21:30 | Cup Group C | Boyacá Chicó | 3-0 | Cúcuta Deportivo |
| 21:30 | Cup Group D | Centauros | 2-2 | Bogotá FC |
| 21:30 | Cup Group F | Deportes Quindío | 0-1 | Deportes Tolima |
| 21:30 | Cup Group F | Deportivo Pereira | 2-0 | Juventud Girardot |
| 21:30 | Cup Group B | Deportivo Rionegro | 0-2 | Envigado FC |
| 21:30 | Cup Group F | Expreso Rojo | 1-1 | Atlético Huila |
| 21:30 | Cup Group B | Itagüí Ditaires | 3-0 | Independiente Medellín |
| 21:30 | Cup Group C | Real Santander | 4-0 | Patriotas FC |