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| 30.01.2010 | |||
| 16:00 | Salisbury City | 2-0 | Maidstone United |
| 20.01.2010 | |||
| 20:45 | Newport County | 0-0 | York City |
| 20:45 | Stalybridge | 1-2 | Corby Town |
| 19.01.2010 | |||
| 20:45 | AFC Wimbledon | 3-1 | Altrincham |
| 20:45 | Cambridge United | 2-2 | Eastbourne |
| 20:45 | Gainsborough | 0-0 | Tamworth |
| 20:45 | Gateshead | 1-0 | Chippenham |
| 20:45 | Kidderminster | 3-2 | Lewes FC |
| 20:45 | Maidenhead United | 0-1 | Barrow AFC |
| 20:45 | Oxford United | 1-0 | Woking |
| 20:45 | Stevenage FC | 6-0 | Vauxhall Motors |
| 20:45 | Workington | 2-1 | Rushden & Diamonds |
| 18.01.2010 | |||
| 20:45 | Chelmsford | 2-1 | Crawley Town |
| 20:45 | Worcester | 1-1 | Carshalton |
| 12.01.2010 | |||
| 20:45 | Blyth Spartans | 1-2 | Guiseley AFC |
| 20:45 | Fleetwood Town | 0-1 | Dover Athletic |