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| 01.09.2009 | |||
| 20:45 | Barnet | 2-0 | Millwall FC |
| 20:45 | Bournemouth | 2-1 | Yeovil Town |
| 20:45 | Burton Albion | 1-5 | Chesterfield |
| 20:45 | Cheltenham | 1-3 | Torquay United |
| 20:45 | Darlington | 1-0 | Lincoln City |
| 20:45 | Gillingham | 1-1/p.4-3 | Colchester United |
| 20:45 | Hereford Utd | 0-0/p.4-2 | Bristol Rovers |
| 20:45 | Morecambe FC | 2-2/p.2-4 | Carlisle United |
| 20:45 | Norwich City | 1-0 | Brentford FC |
| 20:45 | Oldham Athletic | 1-2 | Accrington Stanley |
| 20:45 | Rotherham | 1-2 | Huddersfield |
| 20:45 | Walsall FC | 0-0/p.4-5 | Bury FC |
| 20:15 | Rochdale | 1-2 | Bradford City |
| 20:00 | Crewe Alexandra | 1-4 | Stockport County |
| 20:00 | Milton Keynes Dons | 3-1 | Dagenham & Red. |
| 20:00 | Wycombe | 2-2/p.0-3 | Northampton |