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| 24.09.2009 | |||
| 20:50 | AGOVV Apeldoorn | 1-2 | AFC Ajax |
| 20:00 | Achilles '29 | 0-1 | Gemert |
| 17:00 | Harkemase Boys | 0-5 | Feyenoord |
| 23.09.2009 | |||
| 20:45 | PSV Eindhoven | 2-1 | De Graafschap |
| 20:00 | AFC Amsterdam | 0-1 | WHC Wezep |
| 20:00 | Capelle | 4-0 | RKVV Westlandia |
| 20:00 | De Treffers | 2-0 | BV Veendam |
| 20:00 | FC Lisse | 0-4 | FC Den Bosch |
| 20:00 | FC Utrecht | 2-4 | FC Groningen |
| 20:00 | IJsselmeervogels | 1-2 | Roda Kerkrade |
| 20:00 | VV Baronie | 1-1/p.6-5 | BVV Barendrecht |
| 20:00 | VVV Venlo | 3-0 | ADO Den Haag |