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| 16.09.2021 | |||
| 15:00 | Teramo Calcio | 1-0 | ACN Siena 1904 |
| 15.09.2021 | |||
| 20:30 | Cesena | 1-2 | Virtus Entella |
| 20:30 | Pescara | 2-0 | US Grosseto |
| 20:00 | Pro Vercelli | 2-2/p.2-4 | AlbinoLeffe |
| 18:30 | AC Trento | 0-0/p.3-1 | US Seregno |
| 18:00 | Viterbese | 3-1 | Turris Calcio |
| 17:30 | Catanzaro | 1-0 | Catania |
| 17:30 | Fidelis Andria | 2-1 AET | Virtus Francavilla |
| 17:30 | Foggia Calcio | 2-0 | ACR Messina |
| 17:00 | Avellino | 0-1 | Ancona-Matelica |
| 16:30 | FC Südtirol | 4-1 | Giana Erminio |
| 16:30 | Juventus U23 | 3-2 | FeralpiSalò |