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| 21.09.2009 | |||
| 06:00 | Biwako Seikei | 0-1 | Sagawa Printing |
| 06:00 | Ehime FC (R) | 0-4 | Kochi University |
| 06:00 | NIFS Kanoya | 2-0 | Hamada Cosmos |
| 20.09.2009 | |||
| 08:00 | Okinawa Kariyushi | 4-1 | Tokushima V. (R) |
| 06:00 | Arte Takasaki | 3-0 | FC Koun |
| 06:00 | Arterivo Wakayama | 2-3 | Saga Higashi |
| 06:00 | Fukushima Utd | 3-3/p.3-1 | Shobi University |
| 06:00 | Fukuyama Univ | 0-1 | V-Varen Nagasaki |
| 06:00 | Grulla Morioka | 2-4 | Meiji University |
| 06:00 | Honda Lock SC | 4-0 | Kumamoto Gakuen Univ |
| 06:00 | Nara Club | 1-0 | Saurcos Fukui |
| 06:00 | Nippon Bunri Univ | 1-0 | New Wave Kitakyushu |