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| 15.03.2009 | |||
| 05:00 | FC Kariya | 1-2 | Arte Takasaki |
| 05:00 | Gainare Tottori | 1-0 | MIO Biwako Shiga |
| 05:00 | Honda FC | 0-0 | Honda Lock SC |
| 05:00 | New Wave Kitakyushu | 0-0 | JEF United Chiba (R) |
| 05:00 | Ryutsu Keizai Univ | 0-0 | V-Varen Nagasaki |
| 05:00 | Sagawa Printing | 0-1 | Machida Zelvia |
| 05:00 | Sagawa Shiga | 0-0 | TDK SC |
| 05:00 | Yokogawa Musashino | 1-0 | MM Mizushima |