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| 27.08.2009 | |||
| 21:00 | Lorca Deportiva CF | 1-2 AET | CA Ceuta |
| 26.08.2009 | |||
| 21:30 | SD Tenisca | 2-4 | Cerro Reyes Badajoz |
| 21:00 | Alicante CF | 1-1/p.5-4 | Sporting de Mahón |
| 21:00 | CD Leganés | 1-3 | CF Reus Deportiu* |
| 21:00 | CD Puertollano | 3-1 | Gimn. Torrelavega |
| 21:00 | Marbella FC | 1-0 | Caravaca CF |
| 21:00 | Real Jaén | 0-1 | Unión Estepona |
| 21:00 | UB Conquense | 1-0 | CD Toledo |
| 20:45 | CE Sabadell | 2-0 | Atlético Monzón |
| 20:30 | Deportivo Alavés | 1-1/p.1-4 | CF Palencia |
| 20:30 | RSD Alcalá | 0-1 | Real Oviedo |
| 20:30 | SD Compostela | 1-2 | Zamora CF |
| 20:30 | SD Ponferradina | 1-1/p.5-4 | SD Eibar |
| 20:30 | UDA Gramenet | 0-3 | UE Sant Andreu |
| 20:00 | SD Lemona | 2-2/p.2-4 | Cultural Leonesa |
| 19:30 | CD Lagun Onak | 2-1 | CD Izarra |
| 25.08.2009 | |||
| 20:00 | Villajoyosa | 2-0 | UD Logroñés |
| 22.08.2009 | |||
| 21:00 | San Roque de Lepe | 1-2 | UD Melilla |