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| 07.10.2009 | |||
| 21:00 | Atlético Ciudad | 0-0/p.5-4 | Polideportivo Ejido |
| 21:00 | Córdoba CF | 0-1 AET | Rayo Vallecano |
| 21:00 | Girona FC | 1-3 | Celta de Vigo |
| 21:00 | Hércules CF | 2-0 | SD Huesca |
| 21:00 | Marbella FC | 2-1 AET | Alicante CF |
| 21:00 | Mérida UD | 1-3 | CD Alcoyano |
| 21:00 | Ontinyent 1931 CF | 0-0/p.3-5 | Cultural Leonesa |
| 21:00 | Recreativo Huelva | 2-1 | UD Las Palmas |
| 20:45 | CD Puertollano | 2-1 | UE Sant Andreu |
| 20:45 | UD Salamanca | 2-0 | FC Cartagena |
| 19:30 | CD Lagun Onak | 1-2 | AD Alcorcón |