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| 31.08.2016 | |||
| 21:30 | Atlético Sanluqueño | 1-0 | Real Murcia |
| 21:30 | CD Toledo | 2-0 | UB Conquense |
| 21:00 | Albacete Balompié | 2-1 | Real Unión |
| 21:00 | Extremadura UD | 5-0 | Atl. Mancha Real |
| 21:00 | Racing Ferrol | 3-2 | Zamora CF |
| 20:45 | Lorca Deportiva | 1-2 AET | Lorca FC |
| 20:45 | UE Cornellà | 2-1 AET | UD S.S. Reyes |
| 20:30 | Barakaldo CF | 4-0 | SD Zamudio |
| 20:30 | CD Calahorra | 0-0/p.3-1 | UD Logroñés |
| 20:30 | Lleida CF | 1-0 | AE Prat |
| 20:30 | SD Laredo | 2-3 AET | Cultural Leonesa |
| 20:00 | Atlético Saguntino | 1-1/p.2-4 | SD Formentera |
| 20:00 | CD Boiro | 1-3 AET | CD Guijuelo |
| 20:00 | SD Amorebieta | 2-1 AET | UD Socuéllamos |
| 20:00 | Sestao River | 4-2 | Villa de S. Brígida |
| 19:00 | CA Cirbonero | 0-0/p.6-5 | SD Ponferradina |
| 18:00 | Andorra CF | 0-5 | Hércules CF |
| 18:00 | Caudal Deportivo | 2-1 | Burgos CF |